Дифференциальная спектрофотометрия

Дифференциальная спектрофотометрия отличается высокой степенью точности и чувствительности определений и используется для качественного и количественного анализа веществ, обладающих характерным спектром поглощения. Высокая точность метода дает возможность регистрировать незначительные и быстрые изменения в спектрах поглощения на фоне высокой общей оптической плотности и сильного светорассеяния, проводить определение веществ в общей смеси в присутствии других поглощающих свет компонентов, например определение ци — тохромов или пигментов непосредственно в суспензии хлоропла — стов.

Принцип метода состоит в том, что в качестве «нулевого» раствора берут не чистый растворитель, как при обычных спектрофотометрических определениях, а раствор, содержащий все те же компоненты, что и опытный. Опытная проба подвергается действию света или каких-либо химических реагентов, окисляющих или восстанавливающих определяемое соединение, в то время как контрольная проба не изменяется. Измеряя оптическую плотность опытного образца относительно контрольного, регистрируют разность оптической плотности между контролем и опытом, обусловленную только применяемыми воздействиями.

Измерение дифференциальных спектров осуществляется на двухлучевом спектрофотометре, который включает монохроматор, источник света, камеру для образца, регистрирующее устройство. Луч монохроматического света с помощью специальных призм делится на два пучка света равной интенсивности. Один пучок проходит через опытную, другой через контрольную кювету. На приборе регистрируется разность оптической плотности для двух световых потоков .