Высокая чувствительность
Абсорбционная спектрофотометрия является одним из наиболее широко применяемых в настоящее время методов количественного и качественного анализа в химии, биологии и медицине благодаря сравнительно высокой чувствительности, быстроте определений и высокой точности. В этом состоят ее преимущества перед другими методами химического анализа. Помимо чисто аналитических целей спектрофотометрический метод в последнее время находит все более широкое применение в экспериментальной биологии и химии для исследования механизма различных биологических процессов, кинетики отдельных реакций, тонких структурных изменений биополимеров, для регистрации окислительно-восстановительных изменений отдельных компонентов, связанных с переносом электронов в элект — рон-транспортной цепи фотосинтеза, дыхания и т. д.
В руководстве даны краткое описание общих принципов спектрофотометрии и конкретные примеры ее использования при физиологических исследованиях растительного организма.
Химический анализ методом абсорбционной спектрофотометрии основан на измерении количества света, поглощенного исследуемым веществом или раствором какого-либо вещества.
Уменьшение интенсивности светового потока при прохождении через раствор зависит от количества молекул на его пути и их способности поглощать лучи данной длины волны. Вероятность акта поглощения в тонком слое раствора пропорциональна количеству квантов, падающих на единицу поверхности в единицу времени, количеству молекул в единице объема, толщине слоя Dl : —Dl0 = I0Ondl. Коэффициент а характеризует поглощательную способность молекулы. Он зависит от длины волны излучения, имеет размерность площади и называется Сечением поглощения молекулы.