Выяснение механизма фотосинтеза

При проведении большинства исследований, связанных с выяснением механизма фотосинтеза, необходимо получение функционально активных препаратов изолированных хлоропластов. В настоящее время для выделения хлоропластов используют методы, основанные либо на механическом разрушении ткани листа, либо на разрушении про топластов, предварительно полученных из нее. Любой из двух способов выделения хлоропластов имеет свои достоинства и недо статки. Выбор метода зависит от цели эксперимента, а также во многом определяется видом растения, используемого в эксперименте. Так, из листьев гороха и шпината удается получить доста точно высокий выход в значительной степени интактных хлоропластов при механическом разрушении тканей, тогда как исполъ зование протопластов, согласно литературным данным, не дает больших преимуществ. В то же время при работе с такими растениями, как пшеница, ячмень, табак, мягкое выделение хлоропластов из протопластов позволяет получить более интактные и активные хлоропласты, чем механическое разрушение листьев.

Выделение хлоропластов из протопластов предпочтительно при исследовании локализации ферментов в клетке, так как при этом удается получить больший процент интактных хлоропластов, освобожденных от других клеточных органелл, эпидермальных и проводящих тканей. Кроме того, при выделении хлоропластов из протопластов снижается вероятность агрегации органелл, неспецифического связывания ферментов с органеллами и формирования комплексов белков с таннинами по сравнению с механическим методом выделения хлоропластов.