Бесфитольные формы
«Кислые» бесфитольные формы более полярны, они прочнее удерживаются адсорбентом и в соответствующих системах растворителей менее подвижны, чем фитольные, менее полярные формы пигментов. Фитольные формы более липофильны и растворимы в петролейном эфире, в то время как бесфитольные формы нерастворимы в петролейном эфире, но растворимы в разбавленных растворах щелочи.
Оставшиеся в водно-ацетоновом экстракте бесфитольные пигменты — протохлорофиллид и хлорофиллид извлекаются этиловым эфиром. Предварительно экстракт подкисляют 0,5 —1,0 мл насыщенного раствора однозамещенного фосфата натрия NaH2P04 до pH 4,5 — 5. При этом протохлорофиллид и хлорофиллид переходят из водорастворимой солевой формы в кислую форму, которая лучше растворима в серном эфире.
Флуоресценция — излучение световой энергии при переходе фотовозбужденной молекулы пигмента из первого возбужденного синглетного состояния в основное, невозбужденное состояние. Вероятность излучения поглощенной молекулой энергии в виде света флуоресценции зависит от ряда факторов: химической структуры вещества, его физического состояния, молекулярного окружения, возможности миграции энергии в системе, эффективности преобразования энергии в химическую форму и т. д.
Исследования спектров флуоресценции и кинетики флуоресценции в настоящее время широко используют для характеристики пигментных систем, анализа динамики взаимопревращения пигментов при фотобиологических процессах, характера взаимодействия молекул пигментов в системе, в частности при исследовании первичных реакций фотосинтеза и процессов миграции энергии, для характеристики пигментного состава и функциональной активности первой и второй фотосистем и решения многих других проблем фотосинтеза.