Изучение свойств белковых препаратов

Изучение свойств белковых препаратов хлорофиллазы показало, что фермент может существовать в нескольких формах. Молекула фермента в условиях разведения диссоциирует на отдельные субъединицы, обладающие более высокой удельной активностью, чем агрегированная форма фермента. В опытах с гель-фильтрацией хлорофиллазы через сефадекс G-100 обнаружены две фракции фермента, способные к взаимо — обратимым превращениям. Предполагают, что состояние фермента и степень ассоциации отдельных субъединиц определяют активность хлорофиллазы в нативных структурах и при выделении ферментов из ткани.

Методы определения активности хлорофиллазы основаны на учете количества хлорофиллида в пробе до и после действия фермента. Об активности фермента судят по увеличению количества хлорофиллида в пробе за определенный период инкубации пигмента с препаратом фермента. Образующийся в ходе реакции хлорофиллид отделяют от неизмененного хлорофилла путем распределения фитольных и бесфитольных форм пигмента между полярными и неполярными растворителями. При этом используют способность фитольных форм пигмента извлекаться полностью из смеси неполярными растворителями. В качестве неполярного растворителя берут обычно петролейный эфир. Хлорофиллиды остаются в щелочном водно-ацетоновом растворе. Активность хлорофиллазы можно определить также по убыли хлорофилла в петролейно-эфирной фракции.