Навески листьев гороха
Берут две навески листьев гороха одного яруса по 0,3 г. В первой навеске определяют сумму зеленых пигментов и исходное содержание хлорофиллида в пробе. Для этого навеску листьев растирают с 80 %-м ацетоном в присутствии СаС03 или MgC03, экстракт пигментов фильтруют через стеклянный фильтр и объем доводят в мерной колбе до 50 мл.
Во второй навеске определяют содержание хлорофиллида после действия хлорофиллазы. Навеску листьев растирают с 60 %-м ацетоном и CaC03 , доводят в цилиндре до объема 25 мл и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч в темноте. Реакцию останавливают, добавляя ацетон до его конечной концентрации 80 %. Для этого к гомогенату добавляют равный объем 100 %-го ацетона. Гомогенат фильтруют через стеклянный фильтр и экстракт доводят в мерной колбе до объема 50 мл.
Определение хлорофиллида. Количество хлорофиллида в контрольном и опытном экстрактах определяют по методу Веста и Мак-Кинни. Экстракты контрольного и опытного вариантов делят на две части. Первую половину каждого из растворов оставляют в темноте для определения суммарного содержания зеленых пигментов. Во второй половине экстрактов определяют количество хлорофиллида, удаляя пигменты, содержащие фитол, пет — ролейным эфиром. Для этого к 25 мл водно-ацетонового экстракта добавляют 2,5 мл 0,02 н. NH4OH и смесь переносят в делительную воронку. Туда же приливают 0,2 мл насыщенного раствора NaCl и 5 мл легкого петролейного эфира и смесь энергично встряхивают несколько раз. При этом в петро — лейный эфир переходят липофильные формы пигментов, содержащие фитол: хлорофиллы и каротиноиды. В щелочном водноацетоновом слое остаются гидрофильные, бесфитольные пигменты — хлорофиллиды. После разделения слоев нижний водно-ацетоновый слой собирают в отдельную колбу. Его переносят обратно в делительную воронку и экстракцию повторяют 3 — 4 раза до полного извлечения хлорофиллов. К экстракту каждый раз добавляют ацетон до первоначального объема. После конечной экстракции водно-ацетоновый слой сливают в мерную колбу на 25 мл и доводят чистым ацетоном объем до метки.
